信帆生物提供PCR技術(shù)服務，Q-PCR技術(shù)服務，RT-PCR實驗代做！

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簡介：

Real -Time PCR，即實時監(jiān)測PCR擴增產(chǎn)物并進行解析的方法，它是在PCR反應體系中加入熒光物質(zhì)，并通過Real -Time PCR檢測系統(tǒng)對PCR反應進程中的熒光信號強度進行實時監(jiān)測，zui終對實驗數(shù)據(jù)進行分析處理的方法。Real -Time PCR自1996年由美國Applied Biosystems公司推出以來，廣泛應用于生物研究的各個領(lǐng)域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探針法兩種。

PCR實驗代測，熒光定量PCR代測服實驗室試劑的操作

1)所用的所有溶液都應該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。

2)所有PCR試劑中使用的水都應該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌。

3)在20℃到25℃貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴增反應。

4)所用試劑都應該以大體積配制，實驗一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進行貯存。

5)所有試劑和樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。

6)新配制的試劑在用于準備新的標本之前應該加以檢驗。

7)樣品準備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時都應該小心保存

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操作程序 ：

1．在無菌的Eppendorf管內(nèi)加入以下反應物：

2．93℃ 反應2 min后開始以下循環(huán)： 
93℃變性反應1 min； 
50℃退火反應1 min； 
72℃延伸反應3 min。 
經(jīng)過17～35循環(huán)后，zui后一個循環(huán)72℃增加5 min。循環(huán)結(jié)束后反應產(chǎn)物置于40℃保存。 

3．取1～5ml反應產(chǎn)物走凝膠電泳，經(jīng)溴化乙錠染色檢測擴增的情況。
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PCR實驗代測，熒光定量PCR代測服主要儀器及耗材

旋渦振蕩器 ：上海青浦瀘西儀器廠產(chǎn)品
手握式電動勻漿機：德國FLUKO 公司產(chǎn)品
低溫冷凍離心機：Sigma（3K15）公司產(chǎn)品
Real-time檢測儀：ABI （ABI-7300）公司產(chǎn)品
超純水分離系統(tǒng)：美國LABCONCO公司
離心管及10μL、200μL、1000μL槍頭等常規(guī)耗材均為國產(chǎn)；RNA提取過程中所需的離心管、槍頭等耗材經(jīng)過0.1%的DEPC水浸泡過夜，121℃滅菌30min，烘干后備用。

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